پولی کریلیمائڈ جیل الیکٹروفورسس کے لئے احتیاطی تدابیر

· پولیاکریلامائڈجیل کو لازمی طور پر ایکریلیمائڈ مونومر ، پولیمرائزیشن شروع کرنے والے مواد ، کیٹیلسٹ ، اور نمک اور بفر مرکب کا حق ایک ساتھ ہونا چاہئے۔

· ایکریلیمائڈاور بیس (این ، این '- میتھیلین ڈبل ایکریلیمائڈ) مونومر فارم جیل میٹرکس ہے۔

· امونیم پرسولفیٹ چپکنے والی پولیمرائزیشن کے عمل کو شروع کریں۔ گلو کی تشکیل کے لئے پانی میں تیار کردہ 10 ٪ امونیم پرسولفیٹ حل کی ضرورت ہوتی ہے۔ زیادہ تر معلومات نے فعال استعمال کی ضرورت کا اشارہ کیا۔ تاہم ، سرگرمی کے نمایاں نقصان کے بغیر کئی ہفتوں کے لئے 10 ٪ حل 4 at پر رکھا جاسکتا ہے۔ جب گلو جمع کرنے میں ناکام ہوجاتا ہے تو 10 ملی لیٹر تک بنائیں اور ضائع کردیں۔

اشارہ: کا فیصدایکریلیمائڈترتیب گلو اور پروٹین گلو میں ایک جیسی نہیں ہے۔ اگر پریمیڈ ایکریلیمائڈ کا استعمال کرتے ہوئے: BIS حل ، صحیح بوتل حاصل کرنا یقینی بنائیں۔

· ٹیمڈ (این ، این ، این '، این'- ٹیٹرمیتھیل ایتیلینیڈیمین) ایک بھوری رنگ کی بوتل میں ، ایک کاتالک ہے ، جو فرج میں رکھا گیا ہے۔ گلو ڈالنے سے پہلے اس میں شامل کریں۔

elect الیکٹروفورسس میں پولی کریلیمائڈ الیکٹروفورسس کا استعمال شدہ گلاس ہر بار سے پہلے اور بعد میں دھویا جانا چاہئے۔ الیکٹروفورسس کے بعد ، گرم صابن والے پانی میں نرم برش اور کپڑے سے دھوئیں ، آست پانی سے کللا کریں اور خشک ہونے کے لئے کھڑے ہوں۔

· نمی اور دھول کھوکھلی پولیمر کے ساتھ پیدا ہوسکتی ہے۔ الیکٹروفورسس سے پہلے ، شیشے کی پلیٹ کو شیشے کے کلینر سے صاف کریں اور اسے نرم برش سے مسح کریں۔ آست پانی سے دھوئے اور کاغذ کے مسح سے اچھی طرح خشک کریں۔ کاغذ کے ساتھ مسح کرنے سے پہلے 70 et ایتھنول کے ساتھ کللا کرنے سے خشک ہونے کو صاف کرنے اور تیز کرنے میں مدد ملتی ہے۔ ایکریلیمائڈ کے نمونے یکے بعد دیگرے شامل کریں: بیس ، پانی ، بفر حل ، امونیم پرسولفیٹ ، ٹیمڈ۔ اچھی طرح سے ہلائیں اور فوری طور پر ڈالیں۔

پولیمرائزیشن سے پہلے پولیاکریلامائڈ کو ڈیگاس کرنا ضروری نہیں ہے۔ (بلبلوں کو دور کرنے کے لئے ایکریلیمائڈ کو کسی خلا میں رکھا جاتا تھا کیونکہ آکسیجن پولیمرائزیشن کو روکتی ہے۔)

افقی گلو پوائنٹ نمونے کے نکات۔

clain واضح طور پر دیکھنے کے ل sample کچھ نمونہ سوراخ بنانے کے لئے نیچے والے خانے میں بلیک پیپر کا ایک ٹکڑا ، سیاہ پس منظر میں رکھیں۔
clol کولائیڈ کے بالکل اوپر ، گلو ٹینک سے بھرے بفر۔
· اگر کنارے کی روشنی ہے تو ، لائٹس کو چالو کریں ، روشنی کو کولائیڈ چمکتا ہے۔ نمونہ کو پائپٹ میں کھینچیں۔
paip خودکار پائپٹنگ ڈیوائس کا استعمال۔
10 10-200 میں 1 میں 1 مائع حرکت پذیر نقطہ نمونے کے بیشتر پوائنٹس میں استعمال کیا جاسکتا ہے۔ بہت چھوٹے نمونے والے سوراخوں (10μ1 سے کم) کے لئے ، گلو کی ترتیب کے لئے استعمال ہونے والا لمبا پائپیٹ سر زیادہ آسان ہے۔

sample نمونے میں ڈوبے ہوئے پائپٹنگ ، آہستہ آہستہ چلتے ہوئے سیال کو سانس لیتے ہیں۔ نمونہ گلیسرین کے ساتھ چپچپا دکھائی دے سکتا ہے ، اور تیزی سے پمپنگ ہوا کے بلبلوں کو پائپٹ کے سر میں کھینچ سکتی ہے۔

paip پائپٹنگ سر کو سانس لینے کے بعد نمونے ، پائپ کے کنارے پر ہلکے سے سر کو آہستہ سے منتقل کریں گے یا کاغذ کو صاف کریں گے۔ ہوشیار رہیں کہ نمونے کو چوسنے کا نہ کریں۔

نمونہ کو نمونے کے سوراخ میں رکھیں

tept تھوڑا سا دباؤ برقرار رکھنے کے لئے پائپٹنگ ڈیوائس ، نمونے کو تھوڑا سا بہاو مائع سر بنائیں۔
pap پپیٹنگ سر بفر میں داخل کیا گیا ، جو اسپاٹ سوراخوں سے قدرے زیادہ ہے ، مثبت دباؤ برقرار رکھتا ہے۔ پپیٹ کی نوک کو ایک چھوٹے سے سوراخ میں داخل کیا جاسکتا ہے۔
· آہستہ آہستہ اور مستقل طور پر نمونے نکالیں۔ پائپیٹ کا نوک نقطہ نمونہ سوراخ کے اوپر رکھا گیا ہے ، اور نمونہ سوراخ میں ڈوب جائے گا۔ نمونہ کو دبانے کے بجائے نمونہ کے سوراخ کو بھرنے کے لئے ڈوبنے دیں۔
· ایک بار مائع سر کے ساتھ نمونے کی آخری قطرہ ، مائع دوسری ٹانگ میں منتقل ہوجائے گا ، آہستہ آہستہ مائع حرکت میں اضافہ کرے گا ، بفر سے باہر نکل جائے گا

عمودی گلو کے نمونے لینے کا طریقہ کیسے کریں؟

· عمودی گلو پوائنٹ نمونہ کے سوراخ شیشے کے دو ٹکڑوں کے درمیان تشکیل پائے۔ بہت پتلی گلو میں ، پپیٹ سر دو شیشے کی پلیٹوں کے درمیان بھی نہیں ڈالا جاسکتا۔ گلیسرین دیکھیں! نمونے کے سوراخ پر پائپٹ سر رکھیں اور نمونہ سوراخ میں ڈوب جائے گا۔
sample اس سے پہلے نمونے کے نمونے ، پولی پروپلین ایسیل جیل کے نمونے کے سوراخ کے عمودی نقطہ کو یقینی بنائیں کہ صاف صاف ہے۔ نمونے کے سوراخ کے نیچے ظاہر ہونے والے غیر پولیمرائزڈ ایکریلیمائڈ اور پانی کو دھوئے۔ پانی نمونہ کے سوراخ کو نمایاں طور پر چھوٹا بنا سکتا ہے۔ 25 ملی لٹر یا 50 ملی لیٹر سرنج اور 18 گیج انجکشن استعمال کریں۔ الیکٹروفورسس بفر میں ڈالیں اور نمونہ کے سوراخ کو احتیاط سے فلش کریں۔
sample نمونہ کے سوراخ کو دیکھنا مشکل ہوسکتا ہے ، لیکن اسی کے ساتھ ہی ، باقی آسان ہے۔ اگر زیادہ سوراخ ہیں تو ، نمونہ بفر کا بروموفینول نیلے رنگ کے ساتھ ٹیسٹ کیا جاسکتا ہے۔