پولی کریلامائڈ جیل الیکٹروفورسس کے لئے احتیاطی تدابیر

· polyacrylamideجیل ایکریلامائڈ مونومر، پولیمرائزیشن شروع کرنے والے مواد، اتپریرک، اور نمک اور بفر کے مرکب کے ساتھ مل کر ہونا ضروری ہے.

· acrylamideاور BIS (N, N' - میتھیلین ڈبل ایکریلامائڈ) مونومر فارم جیل میٹرکس ہے۔

· امونیم پرسلفیٹ چپکنے والی پولیمرائزیشن کا عمل شروع کریں۔ گوند کی تشکیل کے لیے پانی میں تیار کردہ 10% امونیم پرسلفیٹ محلول کی ضرورت ہوتی ہے۔ زیادہ تر معلومات فعال استعمال کی ضرورت کی نشاندہی کرتی ہیں۔ تاہم، 10% محلول کو کئی ہفتوں تک 4℃ پر رکھا جا سکتا ہے بغیر کسی سرگرمی کے نمایاں نقصان کے۔ 10 ملی لیٹر تک بنائیں اور جب گلو جمع نہ ہو جائے تو اسے ضائع کر دیں۔

ٹپ: کا فیصدacrylamideگلو اور پروٹین گلو کی ترتیب میں ایک جیسا نہیں ہے۔ اگر پہلے سے تیار کردہ ایکریلامائڈ: BIS محلول استعمال کر رہے ہیں، تو یقینی بنائیں کہ صحیح بوتل مل جائے۔

TEMED (N, N, N ', N' - tetramethyl ethylenediamine) ایک اتپریرک ہے، ایک بھوری بوتل میں، ریفریجریٹر میں رکھا جاتا ہے۔ گلو ڈالنے سے پہلے شامل کریں۔

· polyacrylamide electrophoresis الیکٹروفورسس میں استعمال ہونے والے شیشے کو ہر بار پہلے اور بعد میں دھونا چاہیے۔ الیکٹروفورسس کے بعد، گرم صابن والے پانی میں نرم برش اور کپڑے سے دھوئیں، آست پانی سے دھوئیں اور خشک ہونے کے لیے کھڑے ہوں۔

· کھوکھلی پولیمر کے ساتھ نمی اور دھول پیدا ہوسکتی ہے۔ الیکٹروفورسس سے پہلے شیشے کی پلیٹ کو گلاس کلینر سے صاف کریں اور نرم برش سے صاف کریں۔ آست پانی سے دھو لیں اور کاغذ کے مسح سے اچھی طرح خشک کریں۔ کاغذ سے پونچھنے سے پہلے 70% ایتھنول کے ساتھ کلی کرنا صاف کرنے اور خشک ہونے کو تیز کرنے میں مدد کرتا ہے۔ ایکریلامائڈ کے نمونے یکے بعد دیگرے شامل کریں: BIS، پانی، بفر محلول، امونیم پرسلفیٹ، TEMED۔ اچھی طرح ہلائیں اور فوری طور پر ڈالیں۔

پولیمرائزیشن سے پہلے پولی ایکریلامائڈ کو ڈیگاس کرنا ضروری نہیں ہے۔ (ایکریلامائڈ کو بلبلوں کو ہٹانے کے لیے ویکیوم میں رکھا جاتا تھا کیونکہ آکسیجن پولیمرائزیشن کو روکتی ہے۔)

افقی گلو پوائنٹ نمونہ تجاویز

نچلے باکس میں سیاہ کاغذ کا ایک ٹکڑا ڈالیں، سیاہ پس منظر میں کچھ نمونہ سوراخ زیادہ واضح طور پر دیکھنے کے لئے.
· گلو ٹینک بھرا ہوا بفر، صرف کولائیڈ کے اوپر۔
· اگر کنارے پر روشنی ہے تو لائٹس آن کریں، روشنی کو کولائیڈ کو چمکنے دیں۔ نمونے کو پائپیٹ میں کھینچیں۔
· خودکار پائپٹنگ ڈیوائس کا استعمال۔
· 10-200 MU میں 1 مائع موونگ پوائنٹ نمونے کے زیادہ تر پوائنٹس میں استعمال کیا جا سکتا ہے۔ بہت چھوٹے نمونے کے سوراخوں کے لیے (10μ1 سے کم)، گلو کو ترتیب دینے کے لیے استعمال ہونے والا لمبا پپیٹ سر زیادہ آسان ہے۔

· پائپٹنگ صرف نمونے میں ڈوبی ہوئی ہے، آہستہ آہستہ حرکت پذیر سیال کو سانس لینا۔ نمونہ گلیسرین کے ساتھ چپچپا دکھائی دے سکتا ہے، اور تیزی سے پمپنگ پائپیٹ کے سر میں ہوا کے بلبلوں کو کھینچ سکتی ہے۔

· پائپٹنگ سر کو سانس لینے کے بعد نمونے، پائپ کے کنارے پر مائع سر کو آہستہ سے منتقل کریں گے یا کاغذ مسح کر کے مائع سر کو بوندوں کے باہر چوسیں گے۔ ہوشیار رہو کہ نمونہ نہ چوسیں۔

نمونے کو نمونے کے سوراخ میں رکھیں

· ایک چھوٹا سا دباؤ رکھنے کے لئے آلہ pipetting، نمونے تھوڑا سا اتپرواہ مائع سر منتقل کرنے کے لئے.
· پائپٹنگ سر بفر میں ڈالا جاتا ہے، اسپاٹ ہولز سے قدرے اونچا ہوتا ہے، مثبت دباؤ کو برقرار رکھتا ہے۔ پائپیٹ کی نوک کو ایک چھوٹے سوراخ میں ڈالا جا سکتا ہے۔
· آہستہ آہستہ اور مسلسل نمونے باہر. پائپیٹ کی نوک پوائنٹ کے نمونے کے سوراخ کے اوپر رکھی گئی ہے، اور نمونہ سوراخ میں ڈوب جائے گا۔ نمونے کو اندر دھکیلنے کے بجائے نمونے کے سوراخ کو بھرنے کے لیے ڈوبنے دیں۔
· مائع سر کے ساتھ نمونے کے آخری قطرے کے بعد، مائع دوسری ٹانگ میں چلا جائے گا، آہستہ آہستہ مائع کی حرکت کو بلند کریں، بفر سے باہر نکلیں

عمودی گلو سیمپلنگ کیسے کریں؟

عمودی گلو پوائنٹ نمونہ سوراخ شیشے کے دو ٹکڑوں کے درمیان بنتا ہے۔ بہت پتلی گوند میں، پائپٹ کا سر دو شیشے کی پلیٹوں کے درمیان بھی نہیں ڈالا جا سکتا۔ گلیسرین دیکھو! نمونے کے سوراخ کے اوپر پائپیٹ کا سر رکھیں اور نمونہ سوراخ میں ڈوب جائے گا۔
· نقطہ نمونہ سے پہلے، polypropylene acyl جیل نمونہ سوراخ کے عمودی نقطہ ڈال کرنے کے لئے اس بات کا یقین ہو صاف کللا ہے. غیر پولیمرائزڈ ایکریلامائڈ اور پانی جو نمونے کے سوراخ کے نیچے نمودار ہو سکتا ہے دھو لیں۔ پانی نمونے کے سوراخ کو نمایاں طور پر چھوٹا بنا سکتا ہے۔ 25ml یا 50ml کی سرنج اور 18 گیج کی سوئی استعمال کریں۔ الیکٹروفورسس بفر میں ڈالیں اور نمونے کے سوراخ کو احتیاط سے فلش کریں۔
· نمونے کے سوراخ کو دیکھنا مشکل ہو سکتا ہے، لیکن ساتھ ہی، باقی بھی آسان ہے۔ اگر اضافی سوراخ ہیں تو، نمونے کے بفر کو بروموفینول نیلے رنگ سے جانچا جا سکتا ہے۔